肉的宰后嫩化常见归因于肌原玻璃纤维素板的架构的被破坏，肌原玻璃纤维素板的架构是由内源性核血清油脂水解反响酶光降解塑料肌原玻璃纤维素板和组织骨架核血清引起的。与几百年来始终是加关注话题的钙核血清酶有差异，胱天核血清酶（caspases）前段时间将成为感自身的情况下题。胱天核血清酶在组织凋亡的施行阶段性起着至关很重要的的效应，在其中caspase-3在去逝核血清油脂水解反响中的的效应是各个面和非常复杂的，故此什么值得进一步的骤探索。S-亚硝基化利用调低钙挥发、人体脂肪代谢率、核血清质光降解塑料和组织凋亡来调低肉嫩，例如嫩度和持水水平。企业早期探索找到S-亚硝基化可不可以下降依赖影响线粒体的caspase-3级联反响，这可能会是肌肉组织组织凋亡和鸡肉质量波动的原因分析。caspase-3的探索重大是其与组织凋亡的影响，既使，比较少有探索探究S-亚硝基化调低caspase-3的体系。

2024年9月由杭州农产品加工二本大学张万刚讲解团队合作在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物学为该研究提供了亚硝基化修饰语组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文翻译子标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

中文核心期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2025年引响指数：5.7

公布时段：2024年9月

老客户的单位：南京农业大学

理论研究涂料：蛋白

拜谱展示 技木：亚硝基化修饰组学

技巧行车路线：

一、科学研究成果

01.Caspase-3亲水性

目前为止尚不很清楚NO对caspase-3的治理和改善效用要不要归因于NO介导的S-亚硝基化，与众不同氨水浓度等度的GSNO为外源性NO厂家直销，以引导caspase-3的离体S-亚硝基化。结杲取决于，与是没有GSNO的组好于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3渗透性重要削减（图1），与原本通讯稿一致性。GSNO解决削减caspase-3渗透性的未知情况仍亟需体现了。

图1 的不同密度的GSNO外理对caspase-3几丁质酶的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化程度上

分析Caspase-3的亚硝基化的数量，以系统阐述GSNO对Caspase-3的的反应性。经GSNO治理后，检验到caspase-3蛋清S-亚硝基化密度加剧（图2）。此类的结果揭示，外源性GSNO培养出来可完美成脂caspase-3的离体S-亚硝基化。从未有过惊诧的是，在就没有GSNO具有的對照组中检验到1个很弱的S-亚硝基化带，这揭示caspase-3或者形成内源性的S-亚硝基化。不但，本分析中caspase-3的S-亚硝基化的数量较高，而caspase-3的几丁质酶减少，这与以往的分析同样。那么，caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化修饰语位点尚不清除，还还要进一大步的探寻。

图2 GSNO清理对caspase-3S-亚硝基化含量的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。深蓝色标注的编码队列带表S-亚硝基化肽，朱红色标注的C带表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结核蛋白

结球蛋清酶酶酶成为一个决定性的细胞膜膜骨架球蛋清酶酶酶，在长期保持肌细胞膜膜空间构成的空间构成详尽性和紧缩性部分起着决定性功效，深入分析S-亚硝基化caspase-3对结球蛋清酶酶酶生物生物降解的皮肤敏各样存在决定性目的。与Std（未用胱天球蛋清酶酶酶酶-3和GSNO孵育的刚开始肌玻璃纤维板球蛋清酶酶酶）组相对于，0 μM GSNO组（肌原玻璃纤维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的详尽结球蛋清酶酶酶含磷量正相关较低，表示caspase-3对结球蛋清酶酶酶存在不确定的球蛋清酶酶酶球淀粉酶质质水解效率。在GSNO孵育后，详尽结球蛋清酶酶酶的含磷量清晰增高（P < 0.05）。不仅而且，当GSNO氧浓度增大时，详尽结球蛋清酶酶酶的含磷量将持续上涨（P < 0.05）（图5）。这个找到表达，SNO遮盖的caspase-3以关卡依靠的习惯调节结球蛋清酶酶酶的生物生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3挥发结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙蛋白质-T

肌钙核蛋清-T (TnT)是原肌球核蛋清调理担任肩部肌肉收拢的丝条的一定要肌原化学人造纤维素核蛋清。TnT的生物光吸附特证是验测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化情形下，caspase-3对TnT的生物光吸附情形如图是6图甲中，与Std组（无caspase-3和GSNO的肌原化学人造纤维素）相比较，caspase-3组中30 kDa TnT精彩段落正相关延长，表达caspase-3参与到了TnT的生物光吸附，最后，caspase-3与GSNO的孵育会会造成30 kDa TnT急剧下降。在100和200 μM GSNO组范围内无验测到比较明显的不一致性(P > 0.05)，而当GSNO的质量浓度实现400 μM 时，该精彩段落正相关少(P < 0.05)。某些出现 表达了SNO装饰的caspase-3对TnT生物光吸附的阻止效应。结核蛋清和TnT是caspase-3的敏感脆弱底物，而GSNO清理直接不良影响caspase-3的化学活化可能性会会造成肌原化学人造纤维素核蛋清生物光吸附因素直接不良影响。上述情况上述，NO引导的S-亚硝基化应该按照装饰半胱氨酸残基来调理caspase-3的化学活化，继而进步直接不良影响其对结核蛋清和TnT的核蛋清电离意识，若想直接不良影响牛肉片高品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本学习重要途径讨论S-亚硝基化对caspase-3表达的应响以及其然后对牛羊肉肌原植物仟维身体外降解塑料的应响。球蛋清酶S-亚硝基化都可以表达caspase-3的半胱氨酸残基，然后导至caspase-3吸附性下降，进一次调控了其对牛羊肉肌原植物仟维球蛋清酶的球蛋清酶电离业务能力。

三、拜谱个人心得体会

探究选取了酶活检验，亚硝基化遮盖组学定量分析，WB等判断的方法，知道淀粉酶酶S-亚硝基化会遮盖caspase-3的半胱氨酸残基，这使得了caspase-3几丁质酶的减轻，并举每一步抑制性了其对牛羊肉肌原纤维棉淀粉酶酶的淀粉酶酶淀粉水解本事。本探究为诠释淀粉酶酶质亚硝基化对肉质地的调空制度带来了打了个个新的的视野。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的血清质组学、修饰语血清质组学、细胞代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸款型物料，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total空气氧化备份、氧化钙含量巯基，欢迎大家咨询！

参考资料文献资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663